Proteomix HIC-ADC DARx Column

图1. 色谱柱耐用性考察

色谱柱：Proteomix HIC-ADC DARx Butyl, 4.6 x 35 mm

流动相（常规LC）：A: 1.2 M 硫酸铵 + 50 mM 磷酸盐缓冲液，pH 7.0；B: 50 mM 磷酸盐缓冲液 + 20% 异丙醇，pH 7.0

流速：2 mL/min

梯度：0-100% B，2 min

样品：卵清蛋白（1 mg/mL）；胰凝乳蛋白酶原（0.5 mg/mL）

在含30%异丙醇的极端HPLC-HIC条件下进行600多次连续进样后，色谱柱保留时间重现性依然稳定，Chymotrypsinogen组分的相对标准偏差（%RSD）<5%。此项耐用性研究证实，DARx丁基色谱柱具备优异的稳定性。

图2. 高流速条件下色谱柱重现性测试

色谱柱：Proteomix HIC-ADC DARx Butyl, 4.6 x 35 mm

流动相（质谱兼容）：A: 1.5 M 酒石酸铵溶液，pH 7.0；B: 25 mM 酒石酸铵溶液 + 25% 异丙醇，pH 7.0

流速：2 mL/min

梯度：0-100% B，2 min

样品：SigmaMAb™ ADC Mimic（1 mg/mL）

在质谱兼容、超短梯度的高通量条件下，连续三次进样均表现出高度一致的色谱柱性能。各次进样间的保留时间、DAR组分分离度与峰形均保持稳定，证实该方法在快速分析条件下具备优异的重现性，且色谱柱耐用性出色。

图3. 工艺稳健性研究（批次一致性）

色谱柱：Proteomix HIC-ADC DARx Butyl (5μm, 4.6×35mm)

流动相：A: 1.5 M 酒石酸铵溶液, pH 7.0；B: 25 mM 酒石酸铵溶液 + 25% 异丙醇, pH 7.0

流速：0.5 mL/min

柱温：25 ℃

检测器：UV 214 nm

样品：SigmaMAb™ ADC Mimic

进样量：8 μg

Proteomix HIC-ADC DARx Butyl色谱柱的批间一致性已通过三个独立生产批次的验证，具有良好一致性。在推荐的操作条件下，该色谱柱展现出良好的分析重现性：①保留时间相对标准偏差（RSD）<3%；②DAR谱图分析结果具有高度的一致性和准确性。

图4. 高通量快速分析（单个样品分析时长~5 min）

色谱柱：Proteomix HIC-ADC DARx Butyl (5μm, 4.6×35mm)

流动相：A: 1.5 M 酒石酸铵溶液, pH 7.0；B: 25 mM 酒石酸铵溶液 + 25% 异丙醇, pH 7.0

流速：1.5/2.0 mL/min

柱温：25 ℃

检测器：UV 280 nm

样品：ADC Mimic

进样量：8 μg

Proteomix HIC-ADC DARx Butyl色谱柱适用于在挥发性、质谱兼容的流动相条件下，进行高通量ADC分析。在超短梯度程序与高流速条件下，该色谱柱可同时实现ADC药物抗体比(DAR)分布的定性定量分析，并保持DAR各组分稳定的保留行为与一致的分离度。

图5. 不同配基分离效果对比：DARx Butyl vs. Phenyl

色谱柱：Proteomix HIC-ADC DARx Butyl NP5, 4.6 x 100 mm；Proteomix HIC-ADC DARx Phenyl NP5, 4.6 x 100 mm

流动相：Butyl——A: 1.5 M 酒石酸铵溶液, pH 7.0；B: 25 mM 酒石酸铵溶液 + 25% 异丙醇, pH 7.0

　　　　Phenyl——A: 1.5 M 酒石酸铵溶液, pH 7.0；B: 25 mM 酒石酸铵溶液 + 30% 异丙醇, pH 7.0

流速：0.5 mL/min

样品：SigmaMAb™ ADC Mimic（1 mg/mL）

Proteomix HIC DARx Butyl & Phenyl 在与质谱兼容的条件下，对DAR0至DAR8各组分提供了稳健且可重现的分离；由于苯基高疏水性和特殊选择性，其洗脱时间相较于丁基柱更长，洗脱需要的有机相浓度更高。对于该样品DARx Phenyl色谱柱对DAR6和DAR8细节分离效果更优。