胰岛素(Insulin)是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖等的刺激而分泌的一种蛋白质激素，是机体内唯一降低血糖的激素。根据来源可分为动物胰岛素、人胰岛素和胰岛素类似物;根据作用时间不同，可分为超短效、短效、中效、长效及预混胰岛素(详见表1)。为助力胰岛素药物关键质量属性的精准评估，文中对胰岛素药物分析中常用的HPLC方法及相关色谱柱产品进行了梳理，旨在为方法开发与色谱柱筛选提供清晰、实用的参考指南。

　　本文内容涵盖样品分析案例、产品使用指南、文献分析方法推荐等，欢迎查阅!

表1. 胰岛素分类(根据作用时间不同)

*预混胰岛素：将短效和中效胰岛素按固定比例混合制成

应用案例 | 体积排阻色谱

　　案例1. SRT-C SEC-300色谱柱分析门冬胰岛素样品分子大小变异体

　　Column: SRT-C SEC-300 (5 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

　　Mobile phase: (冰醋酸: 乙腈: 水), pH 3.0=200: 300: 500

　　Flow rate: 0.5 mL/min

　　Detector: UV 276 nm

　　Column temperature: 25°C

　　Injection volume: 50 µL

　　Sample: 门冬胰岛素 (10.0 mM HCl配成4 mg/mL)

图1. SRT-C SEC-300分析门冬胰岛素样品图谱

　　案例2. Zenix SEC-300色谱柱分析门冬胰岛素和鱼精蛋白样品

　　Column: Zenix SEC-300 (3 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

　　Mobile phase: 甲醇: 0.1%二氟乙酸=50: 50 (v/v)

　　Flow rate: 0.5 mL/min

　　Detector: UV 214 nm

　　Column temperature: 25°C

　　Injection volume: 10 µL

　　Sample: 胰岛素样品 (含鱼精蛋白)

图2. Zenix SEC-300分析胰岛素(含鱼精蛋白)样品图谱[1]

　　在胰岛素及其类似物等药物的生产过程中，常会产生聚体、降解产物等杂质。采用SRT-C SEC-300色谱柱，能够实现对聚体、单体以及片段的有效分离，以确保药物纯度达标。

　　鱼精蛋白是由4条富含精氨酸的多肽及少量其他多肽组成的混合物，常以硫酸盐形式存在。不同来源或提取方法会导致其内源异质性，从而影响胰岛素共价物(covalent insulin protamine product，CIPP)稳定性。采用Zenix SEC‑300色谱柱可较好分离胰岛素单体、聚集体、鱼精蛋白及CIPP，便于评估胰岛素活性。

应用案例 | 反相作用色谱

　　案例3. Bio-C18色谱柱分析门冬胰岛素样品有关物质

　　Column: Bio-C18 (5 µm, 300 Å, 4.0×250 mm)

　　Mobile phase:A: 100 mM Na2SO4, pH 3.4+10%乙腈

　　B: 50%乙腈水

　　Flow rate: 1.0 mL/min

　　Detector: UV 214 nm

　　Column temperature: 40°C

　　Injection volume: 10 µL

　　Sample: 门冬胰岛素制剂

图3. Bio-C18分析门冬胰岛素制剂样品图谱

　　Bio-C18色谱柱采用大孔硅胶基质，可耐受高比例水相。在门冬胰岛素等胰岛素药物的有关物质分析中，能够实现主峰与相邻杂质峰的良好分离。

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产品使用指南

　　该内容介绍胰岛素样品分析涉及的液相色谱柱产品的活化、清洗、流动相配置等，可点击查看详情信息，信息将持续更新。

多肽文献分析方法推荐

　　该内容收录多肽类样品分析的相关文献介绍，点击可查看详情，内容也将持续更新，欢迎查看。

　　[1] Srivatsa K, et al. Simultaneous characterization of Insulin HMWP and protamine sulphate in complex formulations through SEC-coupled mass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2021, 203(6): 114188.

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