融合蛋白是指通过基因工程技术将两种或两种以上不同来源的基因序列连接起来，进而在宿主细胞中表达产生的一种新型蛋白质。通常由两个或多个功能结构域组成，这些结构域之间通过连接肽连接。连接肽的长度和氨基酸组成对融合蛋白的结构稳定性和功能发挥至关重要，合适的连接肽能够减少不同结构域之间的空间位阻，保证各结构域独立发挥其生物学活性。在其研发、生产和质量控制过程中，液相分析具有不可替代的重要性。文中对融合蛋白分析中常用的HPLC方法及相关色谱柱产品进行了整理，为分析方法开发与色谱柱筛选提供清晰、实用的参考指南。

本文内容涵盖色谱柱选择指南、应用案例、产品使用方法等，欢迎查阅!

融合蛋白色谱柱选择指南

分子大小变异体 | 体积排阻色谱

案例1. SRT SEC-300 Excel色谱柱分析Fc融合蛋白样品纯度

Column: SRT SEC-300 Excel (5 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 100 mM PB+300 mM Arginine, pH 6.8

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 1 µL

Sample: Fc融合蛋白原液 (MW 102 KD，40 ℃高温处理，100 mg/mL)

图1. SRT SEC-300 Excel分析Fc融合蛋白样品图谱

案例2. SRT-C SEC-300色谱柱分析融合蛋白样品分子大小变异体

Column: SRT-C SEC-300 (5 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 100 mM PB+300 mM Arginine, pH 6.8

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 15 µL

Sample: 融合蛋白 (2.0 mg/mL)

图2. SRT-C SEC-300分析融合蛋白样品图谱

案例3. Unix-C SEC-300色谱柱分析融合蛋白样品分子大小变异体

Column: Unix-C SEC-300 (1.8 µm, 300 Å, 4.6×300 mm)

Mobile phase: 50 mM PB+400 mM Arginine, pH 6.5+10% IPA

Flow rate: 0.2 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 5 µL

Sample: 融合蛋白 (10.0 mg/mL)

图3. Unix-C SEC-300分析融合蛋白样品图谱

基于体积排阻色谱原理式对融合蛋白样品进行分子大小变异体表征。采用SRT SEC-300 Excel或SRT-C SEC-300能够分离聚体、片段。若对分辨率更高要求，可选择1.8 μm小粒径的Unix-C SEC-300。通常融合蛋白具有的疏水性质，建议流动相可添加适当比例的有机相或更换盐种类。

电荷异质体 | 离子交换色谱

案例4. Proteomix SCX色谱柱分析融合蛋白样品电荷异质体

Column: Proteomix SCX-NP5P (5 µm, 4.6×250 mm)

Mobile phase: A: 20 mM 乙酸钠, pH 5.5

B: 20 mM 乙酸钠+1.0 M NaCl, pH 5.5

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 ℃

Injection volume: 8 µL

Sample: 融合蛋白 (pI 7.0，1.0 mg/mL)

图4. Proteomix SCX分析融合蛋白样品图谱

案例5. Antibodix WCX色谱柱分析融合蛋白样品电荷异质体

Column: Antibodix WCX-NP10P (10 µm, 4.6×250 mm)

Mobile phase: A: 20 mM MES, pH 5.8+15% ACN

B: 20 mM MES+0.5 M NaCl, pH 5.8+15% ACN

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 220 nm

Column temperature: 25 ℃

Injection volume: 60 µL

Sample: 融合蛋白 (pI 8.0-9.0，0.5 mg/mL)

图5. Antibodix WCX分析融合蛋白样品图谱

案例6. Proteomix WAX色谱柱分析融合蛋白样品电荷异质体

Column: Proteomix WAX-NP5P (5 µm, 4.6x250 mm)

Mobile phase: A: 20 mM 三乙醇胺+20 mM Bis-Tris-Propane+20 mM N-甲基哌嗪，pH 9.7

B: 20 mM 三乙醇胺+20 mM Bis-Tris Propane+20 mM N-甲基哌嗪，pH 3.7

Flow rate: 0.6 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 ℃

Injection volume: 100 µL

Sample: 融合蛋白 (1.0 mg/mL)

图6. Proteomix SAX分析融合蛋白样品图谱

阴/阳离子交换色谱柱的选择关键在于融合蛋白的等电点，再选择适宜的流动相。采用Proteomix或Antibodix系列色谱柱能够实现酸区、碱区的分离，从而进行纯度测定。

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该内容介绍血液制品分析涉及的液相色谱柱产品的活化、清洗、流动相配置等，信息将持续更新。

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