胶原蛋白(Collagen)是动物体内含量最丰富的蛋白质，约占体内蛋白质总量的30%，其典型结构为由三条多肽链通过氢键缠绕形成的三螺旋结构，并具有特征性的(Gly-X-Y)n重复序列，其中X和Y位点通常为脯氨酸与羟脯氨酸。随着生物工程技术的进步，利用重组DNA技术生产的重组胶原蛋白已在医药、化妆品等领域获得广泛应用。为保证重组胶原蛋白的质量、纯度及生物活性符合预期要求，需建立准确的定性与定量检测方法，有助于制药企业有精准评估胶原蛋白样品纯度。文中介绍不同胶原蛋白分子的分子大小变异体分析案例，为胶原蛋白样品质量控制方法建立提供参考。

应用案例 | 体积排阻色谱

案例1. Zenix SEC-300分析胶原蛋白样品分子大小变异体

Column: Zenix SEC-300 (3 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 50 mM PB+250 mM KCl, pH 6.2

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 215 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 10 µL

Sample: 重组胶原蛋白 (70 KD, 1 mg/mL)

图1. Zenix SEC-300分析重组胶原蛋白样品图谱

案例2. Zenix SEC-300色谱柱分析胶原蛋白样品分子大小变异体

Column: Zenix SEC-300 (3 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 50 mM PB+250 mM KCl, pH 6.2

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 220 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 8 µL

Sample: 重组胶原蛋白 (3.0 mg/mL)

图2. Zenix SEC-300分析胶原蛋白样品图谱

案例3. Zenix SEC-300分析胶原蛋白样品分子大小变异体

Column: Zenix SEC-300 (3 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 50 mM PB+300 mM NaCl, pH 7.0

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 220 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 10 µL

Sample: V型胶原蛋白

图3. Zenix SEC-300分析V型胶原蛋白样品图谱

案例4. SRT-C SEC-300色谱柱分析胶原蛋白样品分子大小变异体

Column: SRT-C SEC-300 (5 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 100 mM PB+10% IPA

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 220 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 10 µL

Sample: 重组人源胶原蛋白 (2 mg/mL)

图4. SRT-C SEC-300分析重组人源胶原蛋白样品图谱

胶原蛋白样品分子大小变异体分析适宜采用较小粒径的Zenix SEC-300 色谱柱能够实现聚集体和碎片峰的有效分离。部分样品也可选用SRT-C SEC-300进行分析。

针对胶原蛋白类样品，已知有数十种分型，还有分子量较小的肽类分子，分子量范围较广，结合实际样品情况，还可采用更大孔径SEC色谱柱如SRT SEC-500，针对肽类分子或可采用更小孔径产品。

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