蛋白质作为生命活动的主要承担者，其种类与功能极为多样。除常见的球形蛋白外，膜蛋白、PEG蛋白、His标签蛋白、糖蛋白、蛋白酶等具有特殊结构或修饰形式的蛋白质，在生物体的结构支撑、物质转运、信号转导等关键生命过程中扮演重要角色，并广泛应用于医药、食品及工业领域。为助力其他蛋白样品关键质量属性的精准评估，本文对部分蛋白样品分析中常用的HPLC方法及相关色谱柱产品进行了整理，旨在为分析方法开发与色谱柱筛选提供清晰、实用的参考指南。

本文内容涵盖色谱柱选择指南、应用案例、产品使用指南等，欢迎查阅!

其他蛋白色谱柱选择指南

膜蛋白类

案例1. Nanofilm SEC-500色谱柱分析膜蛋白样品分子大小变异体

Column: Nanofilm SEC-500 (5 µm, 450 Å, 7.8×300 mm)

SRT-C SEC-500 (5 µm, 500 Å, 7.8×300 mm)

SRT SEC-500 (5 µm, 500 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 10 mM Tris with 0.1% LDAO, pH 8.0

Flow rate: 1.0 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 2 µL

Sample: Photosynthetic Reaction Center in 0.1% LDAO (7 mg/mL)

图1. Nanofilm SEC-500分析膜蛋白复合物样品图谱

PEG蛋白类

案例2. SRT SEC-500色谱柱分析PEG蛋白分子大小变异体

Column: SRT SEC-500 (5 µm, 500 Å, 7.8×300 mm)

SRT SEC-500 (5 µm, 500 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 50 mM PB+300 mM NaCl, pH 7.0

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 50 µL

Sample: 蛋白偶联PEG

图2. SRT SEC-500分析PEG蛋白样品图谱

案例3. Zenix SEC-300色谱柱分析PEG化BSA样品

Column: Zenix SEC-300 (3 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 150 mM PB, pH 7.0

Flow rate: 1.0 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Sample: PEG化BSA、BSA单体、蛋白标准品

图3. PEG化BSA样品与标准蛋白叠加图

蛋白偶联PEG样品可有效延长蛋白的半衰期，增加药物作用时长。引入PEG后样品分子量增加，对比常规蛋白分子量的出峰规律(图3)，偶联PEG的蛋白分子尺寸比同等分子量的蛋白更高，在选择合适孔径体积排阻色谱柱需注意参考水溶性聚合物分析规律。

His标签蛋白类

案例4. SRT-C SEC-500色谱柱分析His标签蛋白样品

Column: SRT-C SEC-500 (5 µm, 500 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 150 mM PB, pH 7.0

Flow rate: 0.8 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 20 µL

Sample: His标签-重组蛋白 (0.89 mg/mL)

图4. SRT-C SEC-500分析His标签蛋白样品图谱

糖蛋白类

案例5. Zenix-C SEC-300色谱柱分析糖蛋白分子大小变异体

Column: Zenix-C SEC-300 (3 µm, 300 Å, 7.8×300 mm)

Mobile phase: 150 mM PB, pH 7.0

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 214 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 10 µL

Sample: 糖蛋白 (1.0 mg/mL)

图5. Zenix-C SEC-300分析糖蛋白样品图谱

案例6. Proteomix SAX色谱柱分析糖蛋白样品电荷异质体

Column: Proteomix SAX-NP5P (5 µm, 4.6×250 mm)

Mobile phase: A: 20 mM 三乙醇胺+20 mMBis-Tris-Propane+20 mM N-甲基哌嗪, pH 9.7

                       B: 20 mM 三乙醇胺+20 mMBis-Tris Propane+20 mM N-甲基哌嗪+0.2 MNaCl, pH 3.7

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 30 µL

Sample: 糖蛋白 (1 mg/mL)

图6. Proteomix SAX分析糖蛋白样品图谱

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该内容介绍激素类药物分析涉及的液相色谱柱产品的活化、清洗、流动相配置等，信息将持续更新。

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