纳米抗体，又称单域抗体或VHH抗体，是一种源自骆驼科等哺乳动物体内天然存在的特殊抗体片段。与传统的抗体相比，其只包含一个重链可变区（VHH）和两个常规的CH2与CH3区，是目前已知最小的完整抗原结合单元，分子量约15 kDa，该结构不仅具备传统抗体同等水平的抗原亲和力与特异性，还因分子量小、结构紧凑、稳定性强及易于工程化改造等特性，已成为生物医学研究与临床应用领域极具前景的候选分子。为助力纳米抗体关键质量属性的精准评估，对纳米抗体样品分析中常用的HPLC方法及相关色谱柱产品进行整理，旨在为方法开发与色谱柱筛选提供清晰、实用的参考指南。

本文内容涵盖色谱柱选择指南、应用案例、产品使用指南、文献分析方法推荐等，欢迎查阅!

纳米抗体色谱柱选择指南

分子大小变异体 | 体积排阻色谱

案例1. SRT-C SEC-150色谱柱分析纳米抗体样品

Column: SRT-C SEC-150 （5 µm, 150 Å, 7.8×300 mm）

Mobile phase: 100 mM PB+300 mM Arginine, pH 6.8

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 10 µL

Sample: VHH01 （26 kDa, 10 mg/mL）

图1. SRT-C SEC-150分析纳米抗体样品图谱

案例2. Zenix-C SEC-300色谱柱分析纳米抗体样品

Column: Zenix-C SEC-300 （3 µm, 300 Å, 7.8×300 mm）

Mobile phase: 150 mM PB, pH 7.0

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 °C

Injection volume: 15 µL

Sample: VHH02 （40 kDa）

图2. Zenix-C SEC-300分析纳米抗体样品图谱

纳米抗体因其分子量较小，常推荐选用孔径为150 Å的体积排阻色谱柱，以便有效分离纳米抗体样品的聚体、片段。分子量较大样品可考虑采用更大孔径SEC柱。当对分离度有更高要求时，可选用粒径更小的Zenix-C系列色谱柱。

电荷异质体 | 离子交换色谱

案例3. Antibodix WCX色谱柱分析纳米抗体样品

Column: Antibodix WCX-NP10P （10 µm, 4.6×250 mm）

Mobile phase: A: 20 mM NaAc, pH 4.5

B: 20 mM NaAc+0.3 M NaCl, pH 4.5

Flow rate: 0.5 mL/min

Detector: UV 280 nm

Column temperature: 25 ℃

Injection volume: 3 µL

图3. Antibodix WCX分析纳米抗体样品图谱

样品制备 | 体积排阻色谱

案例4. SRT-10C SEC-100制备合成纳米抗体样品

Column: SRT-10C SEC-100 （10 µm, 100 Å, 10.0×300 mm）

Flow rate: 1 mL/min

Detector: UV 280 nm

Sample: Sybodies

图4. SRT-10C SEC-100制备不同纳米抗体色谱图[1]

（蓝色：洗脱体积11 mL为该sybody单体;红色：小于10 mL色谱峰为寡聚体;橙色：主峰出峰~16 mL表明该Sybody与色谱柱有较强相互作用）

SRT-10C SEC-100色谱柱采用独特的表面修饰技术，可有效降低合成纳米抗体在分离过程中的非特异性吸附，显著改善其洗脱延迟现象，适用于该类样品的稳定制备。

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产品使用指南

该内容介绍激素类药物分析涉及的液相色谱柱产品的活化、清洗、流动相配置等，信息将持续更新。

纳米抗体文献分析方法推荐

该内容收录纳米抗体样品相关文献分析方案介绍，内容也将持续更新，欢迎查看。

[1] Zimmermann I, et al. Generation of synthetic nanobodies against delicate proteins[J]. Nature Protocols[2025-10-27]. DOI:10.1038/s41596-020-0304-x.

公司网址：https://www.sepax-tech.com.cn

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